液相色谱高压输液系统由溶剂贮存器、高压泵、梯度洗脱装置和压力表等组成。 一、 溶剂贮存器 溶剂贮存器一般由玻璃、不锈钢或氟塑料制成,容量为1~2L,用来贮存足够数量、符合要求的流动相。 二、 高压输液泵 高压输液泵是高效液相色谱仪中关键部件之一,其功能是将溶剂贮存器中的流动相以高压形式连续不断地送入液路系统,使样品在色谱柱中完成分离过程。 高压输液泵通常有恒流泵额恒压泵 1.恒流泵 恒流泵又称机械泵,分机械注射泵和机械往复泵,其中机械往复泵应用较多。 2.恒压泵 能保持输出压力恒定,但输出流量随色谱系统阻力的变化而变化,保留时间重视性差。 目前,恒流泵正逐渐取代恒压泵。 梯度洗脱装置 梯度洗脱装置分为两类:一类是外梯度装置(又称低压梯度),流动相在常温常压下混合,用高压泵压至柱系统,需一台泵即可。另一类是内梯度装置(又称高压梯度),将两种溶剂分别用泵增压后,按电器部件设置的程序,注入梯度混合室混合,再输至柱系统。 梯度洗脱就是在分离过程中使两种或两种以上不同极性的溶剂按一定程序连续改变它们之间的比例,从而使流动相的强度、极性、pH值或离子强度相应地变化,达到提高分离效果,缩短分析时间的目的。 梯度洗脱装置的四种分类: 1.线性梯度 在某一段时间内连续而均匀地增加流动相强度。 2.阶梯梯度 流动相强度从低强度直接改变为较高强度。 3.高压梯度 利用两台高压输液泵,将两种不同极性的溶剂按一定比例送入梯度混合室,混合后进入色谱柱。两种溶液在高压下混合。 4.低压梯度 使用一台高压输液泵,通过比例调节阀将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压输液泵中,溶液在常压(低压)下混合。 优点是使用一台高压输液泵,成本低;能实现二元以上梯度洗脱。 缺点是常压下混合往往容易形成气泡,通常需要配置在线脱气装置;浓度梯度范围较高压梯度窄。 液相色谱仪相关知识

　　液相色谱法是分析化学中发展较快、应用广泛的一种分析方法,特别是高效液相色谱仪已经成为生命科学、材料科学、环境科学等方面必不可少的重要检测方法。现代科学技术的发展使得分析对象越来越复杂,分析要求越来越高,液相色谱的强大功能使其成为新世纪中解决生命科学、材料科学、环境科学等复杂体系发现难题的比较有力的技术和方法。

　　高效液相色谱仪是在经典液相色谱的基础上,引入气相色谱的理论和技术而发展起来的。在高效液相色谱中,流动相与组分之间有一定的亲和力,分离过程的实现是组分、流动相和固定相三者间相互作用的结果,分离不但取决于组分和固定相的性质,还与流动相的性质密切相关,一般情况下,高效液相色谱仪的分析可在室温下进行,由于采用颗粒极细的固定相,柱内压降很大,加上流动相黏度高,因此必须采用高入口压,以此来维持一定的流动相线速。高效液相色谱仪对于挥发性低、热稳定性差、分子量大的物质特别有利,它在医药、生化等方面具有非常重要的作用。

　　色谱柱的常见问题:

　　1.色谱柱污染:

　　目前,基层实验室多采用反相色谱柱,要减少色谱柱的污染比较有效的办法是要纯化样品。凡是样品纯化得越干净,色谱柱的寿命就越长;反之,只有提取没有纯化的样品,色谱柱柱效就会大幅下降。一般来说,要提取纯化好的样品,可以的方法是用流动相溶解样品,这样,一方面能减少色谱图中的溶剂峰干扰,另一方面也能检查样品在流动相中的溶解性。如果样品进样后在流动相中沉淀,会堵塞进样器和柱头,甚至样品分解,出现鬼峰。如果出现样品与流动相不溶要设法改变溶解条件,可更换样品溶剂,或改进样品纯化处理的方法,或滤过去除不溶性物质。

　　2.色谱柱阻塞与对策

　　如果配有保护柱,应先去掉保护柱进行分析。如果色谱柱阻塞,可进行反冲洗。如果问题仍然存在,色谱柱可能被强保留的污染物损坏,建议使用恰当的再生程序。如果问题仍然存在,可能是进口阻塞,更换入口处的筛板或更换色谱柱。如果必要,亦可更换色谱柱。

　　3.严格清场

　　清洗的过程是延长色谱柱寿命的关键,每次分析工作结束时,要做好清场工作。如果流动相是缓冲盐,先用5%甲醇水冲洗30 min以上;如果流动相是离子对,先用50%甲醇水冲洗30 min以上;如果流动相是酸性溶剂,先用纯水冲洗30 min以上,流速0.5 mL#min-1,*过度到用色谱甲醇冲洗色谱柱,目的是冲去吸附在柱上的强保留组分。如果用甲醇-水为流动相也应这样冲洗色谱柱,在一定程度上可恢复柱效。