高效液相色谱仪的应用范围日益扩展。由于它使用了非破坏性检测器,样品被分析后,在大多情况下,可除去流动相,实现对少量珍贵样品的回收,亦可用于样品的纯化制备。 一、分离效能高 由于新型高效微粒固定相填料的使用,液相色谱填充柱的注销可达5×10 3～3×10 4块/m理论塔板数,远远高于气相色谱填充柱10 3块/m理论塔板数的柱效。 二、检测灵敏度高 在高效液相色谱仪中使用的检测器大多数都具有较高的灵敏度。如被广泛使用的紫外吸收检测器,最小检出量可达10 9 g,用于痕量分析的荧光检测器,最小检出量可达10-12 g。 三、分析速度快 由于高压输液泵的使用,相对于经典液相色谱,其分析时间大大缩短,当输液压力增加时,流动相流速会加快,完成一个样品的分析时间仅需几分钟到几十分钟 四、选择性高 由于液相色谱柱具有高柱效,并且流动相可以控制和改善分离过程的选择性。因此,高效液相色谱仪不仅可以分析不同类型的有机化合物及其同分异构体,还可以分析在性质上极为相似的旋光异构体,并已在高疗效的合成药物和升华药物的生产控制分析中发挥了重要作用。 液相色谱在操作过程中需注意哪些

　　液相色谱仪根据固定相是液体或是固体,又分为液-液色谱(LLC)及液-固色谱(LSC)。现代液相色谱仪由高压输液泵、进样系统、温度控制系统、色谱柱、检测器、信号记录系统等部分组成。与经典液相柱色谱装置比较,具有高效、快速、灵敏等特点。

　　液相色谱仪操作步骤:

　　1. 首先对流动相进行过滤,根据需要选择不同的滤膜,一般为有机系和水系,常用的孔径为0.20um和0.45um。

　　2. 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。

　　3. 正常情况下,仪器首先用甲醇冲洗10-20分钟,然后再进入测试用流动相(如流动相为缓冲试剂,则要二次重蒸水冲洗10-20分钟,直至色谱柱中有机相冲净为止) 。

　　4. 一般情况下,流动相冲洗20-30分钟后,仪器方可稳定,较为重要的是仪器基线走后,方可进样测试。

　　5. 同时进两针标样,将其结果相比较,其结果的比值在0.98-1.02之间后,就可以正式进行样品的测试了。

　　6. 样品测试结束后,就要进行色谱仪及色谱柱的清洗和维护。如流动相为缓冲试剂,同样也要用重蒸水清洗10-20分钟,方可用有机相进行保护,否则,有损色谱柱。

　　7). 关机时,先关计算机,再关液相色谱。

　　液相色谱注意事项:

　　1. 流动相均需色谱纯度,水用20M的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。

　　2. 柱子是非常脆弱的,第一次做的方法,先不要让液体过柱子。

　　3. 所有过柱子的液体均需严格的过滤。

　　4. 压力不能太大,可以不要超过150kgf/cm2 .

　　5. 因为缓冲试剂遇有机溶剂,会结晶,有损色谱柱,所以,每次由有机相变流动相或流动相变有机相均需用蒸馏水清洗。